AUTORES
- María Dolores Fuentes Marín. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza).
- María López Gómez. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza).
- Ana Cristina Miguel Molinos. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza).
- Marta Sabanza Belloso. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza).
- Gabriel Ciprian Negru. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza).
- Beatriz Jiménez Moraleda. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza).
RESUMEN
Actualmente, las enfermedades infecciosas siguen causando una elevada mortalidad y morbilidad. Los métodos de diagnóstico microbiológico se basan en el cultivo seguido de la identificación fenotípica del microorganismo una vez aislado, y el tiempo necesario para su obtención puede variar de 24 a 48 horas. Dado que la identificación microbiológica repercute directamente en el manejo del paciente y su pronóstico, son necesarias nuevas herramientas diagnósticas capaces de detectar e identificar cualquier microorganismo de manera rápida y fiable. 1
La espectrometría de masas ha surgido como una alternativa rápida y eficaz a los métodos convencionales para la identificación de microorganismos.1
Este artículo pretende describir la tecnología de espectrometría de masas en una de sus formas más utilizadas, la que se lleva a cabo mediante desorción-ionización por láser asistida por matriz acoplada a un analizador TOF o de tiempo de vuelo (MALDI-TOF).
PALABRAS CLAVE
MALDI, espectrometría de masas, desorción, ionización, proteómica, espectro.
ABSTRACT
Infectious diseases are still a cause of high mortality and morbidity rates. Current microbiological diagnostic methods are based on culture and phenotypic identification of isolated microorganisms, which can be obtained in about 24-48 hours. Given that the microbiological identification is of major importance for patient management, new diagnostic methods are needed in order to detect and identify microorganisms in a timely and accurate manner.1
Mass spectrometry has emerged as a rapid and consistent alternative to conventional methods for microorganism identification.1
This article pretends to describe the most widely used mass spectrometry technologies in one of its most used forms, which is carried out by means of matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight (MALDI-TOF).
KEY WORDS
MALDI, spectrometry mass, desorption, ionization, proteomics, spectrum.
INTRODUCCIÓN
La espectrometría de masas es una técnica de determinación estructural que permite estudiar la distribución de las moléculas de una sustancia en función de su masa. 2,3
Un espectro de masas es una relación de las especies iónicas presentes en una muestra, expresadas en función de su relación masa/carga (m/z) y la abundancia relativa (intensidad) de cada una de ellas una de ellas en la muestra. 1-8
La espectrometría de masas fue utilizada históricamente como una técnica analítica de química clínica, pero no fue hasta hace tres décadas con la aparición de las técnicas de “ionización suave” cuando se consiguió analizar biomoléculas de gran tamaño utilizando un láser como fuente de ionización y una matriz orgánica para facilitar el proceso. De ahí el nombre MALDI-TOF, que obedece a las siglas Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight o ionización-desorción asistida por matriz con tiempo de vuelo.3,8
OBJETIVO
El objetivo de este artículo es describir en qué consiste la espectrometría de masas MALDI-TOF, describiendo en qué se basa y sus fundamentos teóricos, su funcionamiento, su metodología de trabajo y su aplicabilidad dentro del diagnóstico microbiológico como herramienta de identificación de microorganismos de interés clínico.
METODOLOGÍA
Se ha llevado a cabo una revisión bibliográfica seleccionando publicaciones extraídas en texto completo de bases de datos de reconocido prestigio dentro del ámbito científico y biomédico como Elsevier, Scielo, y PubMed.
También se ha accedido a artículos académicos relacionadas con el tema de estudio empleando el buscador Google Scholar y se han consultado documentos de webs como SEIMC (Sociedad española de Microbiología Clínica) y SEQCML (Sociedad Española de Química Clínica y Medicina de Laboratorio), de contrastada relevancia dentro del área de Microbiología.
Por último, hay que señalar que se han empleado conocimientos obtenidos fruto de la práctica diaria de trabajo dentro del Servicio de Microbiología y Parasitología del Hospital Universitario Miguel Servet de Zaragoza, donde los autores de este artículo prestan sus servicios, así como también se ha hecho uso de la información extraída de la lectura de manuales y Procedimientos Normalizados de Trabajo (PNTs o PTAs) disponibles en la intranet de dicho centro de trabajo.
RESULTADOS
Fundamento de la técnica de espectrometría de masas MALDI-TOF:
La espectrometría de masas ha irrumpido en el laboratorio de microbiología ofreciendo una alternativa rápida y fiable para la identificación de microorganismos. La reciente creación de plataformas simples y fáciles de utilizar dirigidas al diagnóstico microbiológico ha llevado a su creciente incorporación a los laboratorios de microbiología. Las plataformas comercializadas hasta el momento utilizan la espectrometría de masas para la identificación de microorganismos mediante dos aproximaciones diferentes: la identificación basada en el perfil proteico específico de cada microorganismo (aproximación proteómica) o el análisis de sus ácidos nucleicos (aproximación genómica).1-3
Los métodos basados en la Proteómica se basan en el estudio y caracterización del conjunto de proteínas expresadas por un genoma (proteoma). La identificación de microorganismos basada en el perfil de proteínas obtenido mediante la espectrometría de masas permite la identificación de aislamientos clínicos de dichos microorganismos de diversos orígenes directamente desde los medios de cultivo habituales y sin condiciones especiales como método de rutina.4
La espectrometría de masas es una técnica que permite analizar con gran precisión la composición de diferentes elementos químicos al hacer la medición de iones derivados de moléculas separándolos en función de su relación masa/carga (m/z). 1-4
La espectrometría de masas MALDI-TOF permite la tipificación de microorganismos a nivel de género y especie (y en determinados casos también subespecie), de forma rápida y sencilla. 1-7
Mediante esta técnica se obtiene un espectro de masa compuesto por los diferentes picos (m/z) obtenidos tras la ionización y desorción de los péptidos y pequeñas proteínas característicos de cada especie bacteriana. El espectro con un rango entre 2.000-20.000 Da, representa de manera predominante a las proteínas ribosómicas de los microorganismos (conservadas y abundantes).4
Componentes y funcionamiento del espectrómetro de masas MALDI-TOF:
Un espectrómetro de masas se compone de tres unidades funcionales:
– Una fuente ionizante para transferir iones a las moléculas de la muestra en una fase gaseosa.
– Un analizador de masas que separa los iones de acuerdo con su relación masa/carga.
– Un dispositivo de detección para monitorizar los iones separados. 4,5,7,8
Las características más importantes del espectrómetro de masas MALDI-TOF son las siguientes:
– Para obtener iones de forma adecuada es necesario que la muestra esté embebida en una matriz orgánica.
– Como fuente de ionización emplea un láser y se generan iones tras bombardear la muestra con fotones (láser).
– La separación de los iones se produce según el «tiempo de vuelo».
– El espectro se genera mayoritariamente por iones univalentes.
– El tiempo de obtención del espectro es muy corto, aproximadamente de un minuto para 10-12 g de un compuesto de masa/carga (m/z) de 1.000 Daltons.4,8
Por lo tanto, mediante la aplicación de energía láser a una muestra embebida en una matriz, se consigue vaporizar e ionizar esa matriz, que eventualmente puede arrastrar en esa vaporización e ionizar a su vez a una muestra representativa de las proteínas contenidas en la muestra. Estas proteínas ionizadas son sometidas a aceleración en un campo eléctrico y a una migración a través de un tubo de vacío hasta un detector. El tiempo que transcurra desde su vaporización/ionización hasta su detección dependerá del cociente masa/carga (m/z) de esa proteína, y ese cociente m/z permitirá determinar la masa exacta de la proteína de manera extremadamente fiable. En el caso de los microorganismos, se genera de esta forma un perfil de proteínas con diferentes cocientes m/z, que se comporta como una huella única para cada especie de microorganismo.4
Preparación de muestras y flujo de trabajo en la espectrometría de masas MALDI-TOF:
El primer paso para obtener un espectro de masas es depositar la muestra problema sobre uno de los pocillos de la tarjeta MALDI-TOF. Las tarjetas MALDI-TOF tienen 96 pocillos y generalmente son de acero, reutilizables, pero también pueden ser de cerámica o plástico desechables.3,4,5,6,7
Como muestra son aptas células bacterianas o fúngicas enteras (colonia), células lisadas y extractos bacterianos crudos. El espécimen, colonia o resultado de extracción del microorganismo, debe depositarse en uno de los 96 pocillos de la tarjeta metálica. 3,4,8
Para poder obtener un buen espectro de masas por MALDI-TOF que permita la identificación del microorganismo debe aislarse el microorganismo en las mejores condiciones. Para ello deben observarse una serie de precauciones con relación al procesamiento y tratamiento previo de los microorganismos.3,4,8
Los microorganismos se pueden obtener a partir de un cultivo en medio sólido o líquido. En cualquier caso, se debe tratar de cultivos puros, con independencia de que los medios sean o no selectivos, de no más de 18-48 horas de incubación para evitar esporas (Bacillus spp.), productos metabólicos (Arthrobacter spp.) o autolisis (Streptococcus spp.).4
En caso de cultivos de más de 48 horas de incubación se realizará una resiembra previa a la identificación.4
La muestra se puede procesar mediante transferencia directa a la tarjeta metálica (procedimiento de rutina) o tras emplear una técnica de extracción. La extracción con etanol, ácido fórmico y acetonitrilo rompe las células y libera las proteínas, lo que permite conseguir mejores resultados en la identificación de algunos microorganismos. La composición de la solución de extracción es independiente de la especie bacteriana.4,8
Si se sospecha que el microorganismo es una levadura o si se quiere mejorar la identificación en otros microorganismos, se añade, sobre la muestra depositada en el pocillo de la placa de MALDI, 1 µl de ácido fórmico al 70% y se deja secar totalmente. A continuación, se añadirá la matriz en los 5 minutos siguientes. Si se trata de muestras de cultivos en spot procedentes de hemocultivos positivos, se procede de la misma forma, pero empleando 1 µl de ácido fórmico al 100%. De esta manera, se obtienen resultados de identificación más satisfactorios y con mayor score.4
En la placa de análisis se debe aplicar una cantidad de muestra adecuada (no es conveniente aplicar demasiada muestra) con una distribución fina y homogénea para obtener cristales pequeños y uniformes, de modo que los impactos del láser sean similares en toda la muestra. 3-7
Una vez que la muestra está seca, se añade la matriz. Una vez añadida la matriz a la tarjeta, es importante dejar secar en reposo a temperatura ambiente para que cristalice de forma óptima. 3-7
Otra opción recomendada por ciertos autores para la preparación de la muestra es la co-cristalización de la muestra con la matriz, añadiendo la matriz después de la muestra sin esperar a que ésta se haya secado. Se recomienda dejar secar al aire sin que la luz incide directamente sobre la muestra, para favorecer la homogénea cristalización de la matriz.3
Las matrices utilizadas en la espectrometría de masas MALDI-TOF son compuestos que contienen en su estructura un anillo bencénico conjugado que absorbe la energía UV irradiada por el láser y que se volatilizan fácilmente formando iones en una cámara de alto vacío. La matriz permite la producción de iones intactos en fase gaseosa de biomoléculas de gran tamaño, no volátiles y termolábiles, como las proteínas. El papel fundamental de la matriz es absorber y, después, transmitir la energía del láser a la muestra, facilitando su ionización. 3,4,8
La matriz más utilizada en Microbiología Clínica es el ácido α-ciano-3,4-hidroxicinámico (HCCA).3,4,8
Respecto a la matriz, es conveniente conservarla alejada de la luz, ya que es fotosensible y se puede degradar. Además, se debe mantener tapado el tubo eppendorf que contiene la matriz mientras se va dispensando para evitar su evaporación y la formación de cristales. 4
Después de la cristalización de la matriz y del compuesto, la placa metálica se introduce en el espectrómetro de masas, en donde la mezcla es irradiada con pulsos cortos de un rayo láser UV (por lo general, un haz de láser con longitud de onda de 337 nm). La interacción entre los fotones de las moléculas de láser y de la matriz, causados por la absorción de la energía del haz, desencadena una sublimación de la matriz en una fase gaseosa, seguida por la ionización de la muestra del microorganismo con mínima fragmentación (por ello se denomina “ionización suave”). Al ionizarse, las proteínas son aceleradas a través de un campo electrostático y luego son expulsadas en un tubo de vuelo al vacío donde se separan en función de su velocidad o tiempo de vuelo, llegando finalmente al detector de masas que genera información característica de la composición del microorganismo mediante un espectro de picos, frente a su relación masa/carga (m/z), llamada también huella digital de la masa de los péptidos (peptide mass fingerprinting).3,4,7,8
Aplicaciones de la técnica MALDI-TOF en Microbiología:
La aplicación más utilizada y validada de la espectrometría de masas MALDI-TOF es la identificación de microorganismos. En este caso, el rango de masas de interés está entre los 2.000 Da y los 20.000 Da. La mayoría de los picos de masas que se obtienen en este rango representan proteínas ribosómicas. El conjunto de estos picos de masas constituye el espectro del microorganismo y éste se va a considerar una huella peptídica. Este concepto hace alusión a la singularidad del espectro generado, siendo esta huella peptídica única para cada microorganismo.3
El perfil proteico generado se compara con los perfiles proteicos almacenados para cada microorganismo en la base de datos del equipo que se esté utilizando, de forma que se pueda emitir un informe de identificación en unos pocos segundos. Los algoritmos utilizados para comparar los espectros y asignar un resultado de identificación pueden variar en función del fabricante. El uso cada vez más extendido de bases de datos validadas y cada vez más extensas permite la aplicación de esta tecnología en la rutina diaria de los laboratorios de Microbiología.3
La espectrometría de masas permite identificar bacterias, micobacterias, actinomycetales, levaduras, hongos filamentosos y parásitos. 1,2,3,6
Identificación de microorganismos a partir de hemocultivos:
Se ha descrito una variedad de protocolos diseñados para identificar directamente y con precisión los microorganismos presentes en hemocultivos positivos con diferentes procedimientos de preparación de la muestra. Algunos incluyen el empleo de tubos con gel separadores de suero para separar eritrocitos y proteínas a partir de los caldos de hemocultivos, lisis de las células sanguíneas con ácido fórmico o ácido trifluoroacético, centrifugaciones diferenciales o filtración a través de membranas.2
Ferreira y colaboradores emplearon un protocolo de preparación de la muestra consistente en una centrifugación a baja velocidad (2000 g por 30 segundos) utilizada para eliminar los leucocitos y otra a alta velocidad (15,500 g 5 minutos) para concentrar bacterias, seguida de un procedimiento de extracción con etanol absoluto, ácido fórmico al 70% (v/v) y acetonitrilo. 2
Estudios más recientes han evaluado la introducción de un procedimiento de filtración a través de membranas para eliminar células sanguíneas y proteínas séricas que permite obtener espectros microbianos libres de interferencias, con concordancias cercanas al 80% que muestran también un desempeño superior para bacterias gramnegativas y levaduras.2
En nuestro centro de trabajo, para realizar la identificación rápida de los microorganismos patógenos de hemocultivos positivos (que siempre son muestras de especial relevancia por su carácter de urgencia) se realiza, paralelamente a una tinción de Gram (para diagnóstico preliminar), una siembra en spot que consiste en dispensar gotas directamente del frasco de hemocultivo positivo sobre una placa de agar sangre que se incuba a 37ºC y en atmósfera enriquecida en CO2 .En unas 3-4 horas se obtienen colonias que pueden identificarse mediante espectrometría de masas MALDI-TOF de forma satisfactoria, especialmente en el caso de patógenos Gram negativos. Los patógenos Gram positivos presentan resultados variables en cuanto a identificación mediante MALDI-TOF, ya que con algunos se obtienen buenos resultados de identificación en 3-4 h, pero otros Gram positivos requieren mayor tiempo de incubación (2- 4 horas más).
Esta técnica es especialmente interesante en la identificación de microorganismos aislados en muestras de pacientes hospitalizados graves, en casos de sepsis, de urgencias lo que permite un diagnóstico rápido en esos casos concretos de especial urgencia y un adelanto considerable de tiempo, ya que no es necesario esperar 18-24 horas de crecimiento de las colonias de un cultivo convencional.
Identificación de marcadores de resistencia los antibióticos:
Además de la identificación de microorganismos, la tecnología MALDI-TOF se ha aplicado a la detección de marcadores de resistencia de los microorganismos frente a los antibióticos, en especial, en la determinación de la producción de β-lactamasas. En estos ensayos, una solución tamponada del antibiótico es mezclada con el cultivo e incubada. Esta mezcla es centrifugada y el sobrenadante es analizado por MALDI-TOF. Las bacterias productoras de β-lactamasas inactivan el anillo β-lactámico del antibiótico y tanto el desplazamiento de las masas de las formas no hidrolizadas del antibiótico a las hidrolizadas, como la aparición de nuevos picos por la formación de productos de degradación del mismo son detectados en el espectro de masas, permitiendo confirmar la presencia o ausencia de bacterias productoras de estas enzimas.2,3
Recientemente, se ha descrito la utilidad de la tecnología MALDI-TOF para la detección de cepas de E. coli productoras de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE), mediante la visualización de un pico específico en el espectro de masas.2
Sistemas comerciales disponibles de MALDI-TOF:
En la actualidad los sistemas más extendidos son el VITEK MS (bioMérieux, Francia) y el MALDI Biotyper (Bruker Daltonik, Alemania). Cada sistema tiene su propia base de datos de microorganismos, que es propiedad del sistema y que construyen y mantienen las propias compañías. 3
Las comparativas entre los dos sistemas muestran resultados muy similares, situándose ambos en porcentajes de identificación superiores al 85%.3
En nuestro centro de trabajo disponemos del espectrómetro fabricado por Bruker Daltonik, MALDI Biotyper.
El software del MALDI Biotyper trabaja con comparación entre espectros. En el análisis del espectro, se tiene más en cuenta el perfil completo, que la presencia puntual de ciertas proteínas en el mismo y se sigue un algoritmo estadístico en el que se valora la masa de los picos, la intensidad de estos y su frecuencia.3,4
El software proporciona un resultado de identificación asociado a un score (puntuación). Este score es el grado de similitud entre el espectro de la muestra en estudio y los espectros correspondientes a ese microorganismo en la base de datos del equipo. Los criterios de interpretación establecen los siguientes valores:
– Score ≥ 2,3: Identificación segura (muy alta probabilidad) a nivel de género y especie.
– Score entre 2 y 2,2: Identificación segura del género, pero identificacion probable a nivel de especie.
En ambos casos anteriores, los resultados suelen interpretarse como una identificación positiva satisfactoria.
– Score entre 1,7 y 1,9: Probable identificación a nivel de género, que requiere pruebas adicionales para una identificación positiva a nivel de especie.
– Score < 1,7: Se interpreta como identificación poco fiable. 2,3,4
Existe también un código de colores y letras asociado:
– Verde o nivel A: Corresponde a un valor con alta confianza, con un score > 2.
– Amarillo o nivel B: Corresponde a un valor con bajo nivel de confianza, con un score entre 1,7 y 2.
– Rojo nivel C: Corresponde a una identificación imposible o no fiable con un score < 1,7. 3
Limitaciones en la identificación de microorganismos mediante espectrometría de masas MALDI-TOF:
Se pueden producir errores en la identificación por espectrometría de masas MALDI-TOF entre los microorganismos pertenecientes al grupo de los Streptococcus viridans y Streptococcus pneumoniae (neumococo), resultando adecuado para Enterococos y Streptococos beta-hemolíticos. En estos casos, se debe confirmar con una prueba alternativa para la identificación de S. pneumoniae (por ejemplo, la sensibilidad antibiótica frente a la Optoquina).4
El MALDI-TOF no discrimina entre Escherichia coli y Shigella spp..En estos casos, la identificación se completará si es necesario (cuadro clínico compatible con shigelosis, hemocultivos positivos) mediante pruebas bioquímicas (por ejemplo TSI o pruebas serológicas rápidas de aglutinación para serotipar los microorganismos sospechosos de ser E. coli o Shigella spp.).4
Ventajas e inconvenientes de la espectrometría de masas MALDI-TOF en el diagnóstico microbiológico:
Las ventajas son el alto rendimiento, el bajo coste en reactivos, la aplicación en muestras sólidas y la facilidad de uso. En el caso de la identificación tiene especial relevancia la rapidez en la emisión de resultados, la posibilidad de emplear una porción muy pequeña de colonia y la identificación de microorganismos difíciles de identificar por métodos convencionales.1,2,3,6,7
La principal desventaja es el alto coste del equipo, la imposibilidad de identificar microorganismos muy relacionados entre sí, o microorganismos que no estén presentes en la base de datos. Con el tiempo, estas limitaciones seguramente serán menores, ya que el precio de las tecnologías suele descender con el tiempo y las bases de datos pueden ir ampliándose con el tiempo, tanto las comerciales y propias del equipo, como las mismas entradas que pueden ir incorporando los usuarios al equipo.3
CONCLUSIONES
La espectrometría de masas MALDI-TOF es un método de Proteómica que se emplea para el análisis de las proteínas de los microorganismos, lo que permite que pueda usarse para la identificación de microorganismos patógenos en muestras de interés clínico.
La principal ventaja de la espectrometría de masas MALDI-TOF es la rapidez que ofrece la técnica, ya que una vez aislados los microorganismos de las muestras clínicas y una vez realizados los proyectos que se introducen en el MALDI-TOF, la identificación microbiológica se obtiene en pocos minutos, permitiendo identificar a nivel de género y especie (en determinados casos también subespecie) e indicando el nivel de validez de la identificación mediante un score o puntuación que indica el nivel de confianza del resultado.
El principal inconveniente de la técnica MALDI-TOF es que presenta limitaciones en cuanto a la identificación de determinados microorganismos muy relacionados entre sí, ya que no es capaz de diferenciar o discriminar entre algunos géneros concretos (Streptococcus viridans de Streptococcus pneumoniae, E. coli de Shigella spp.), por lo que en estos casos concretos, para lograr la identificación inequívoca del microorganismo patógeno, a nivel de género y especie, será necesario realizar otros ensayos complementarios como pruebas de sensibilidad antibiótica, pruebas bioquímicas y pruebas serológicas de aglutinación para serotipado.
Otro inconveniente de la espectrometría de masas MALDI-TOF es que se trata de una tecnología ampliamente distribuida pero que actualmente no está disponible en todos los hospitales, aunque se espera que paulatinamente se vaya introduciendo en todos los demás.
Además, el sistema MALDI-TOF es muy delicado en lo referente a manejo y componentes, lo que a veces se traduce en fallos del láser y del sistema de vacío, lo que puede ocasionar retrasos en la identificación microbiológica cuando estos fallos tienen lugar y reparaciones frecuentes.
Por otro lado, hay que señalar que la espectrometría de masas MALDI-TOF es especialmente interesante en la identificación de microorganismos aislados en muestras de pacientes hospitalizados graves, en casos de sepsis, de urgencias o de UCI, ya que si a estos pacientes se les extraen hemocultivos y dan positivo, se pueden realizar cultivos en spot a partir de estos hemocultivos y obtener resultados de identificación del microorganismo patógeno causal en 3 horas, ya que con la técnica de MALDI-TOF es posible una identificación a partir de colonias crecidas en ese tiempo sin esperar a las 18-24 h de cultivo convencional, lo que permite un diagnóstico rápido en esos casos concretos de especial urgencia, que contribuye a una instauración más oportuna y eficaz de la terapia antibiótica adecuada.
Además, la tecnología MALDI-TOF se presenta como una alternativa muy interesante en la detección de marcadores de resistencia de los microorganismos frente a los antibióticos, en especial, en la determinación de la producción de β-lactamasas e identificación de cepas productoras de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE), lo que hace que dicha técnica no solo sea útil a nivel de identificación de patógenos en muestras clínicas sino también a nivel epidemiológico y de Programas de Optimización de uso de Antimicrobianos (PROA).
En conclusión, puede decirse, pese a sus inconvenientes, que la tecnología MALDI-TOF constituye una técnica imprescindible actualmente en el Laboratorio de Microbiología para la identificación microbiológica, ya que permite identificar con precisión diversos tipos de microorganismos como bacterias, micobacterias y Actinomycetales, levaduras y hongos filamentosos y parásitos, haciendo que dicha técnica sea superior a los métodos convencionales de identificación debido principalmente a su elevada fiabilidad y rapidez, presentando además otras aplicaciones muy útiles en muestras concretas de especial urgencia y gravedad y en estudios epidemiológicos.
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